Técnicas do DNA

A sequênciação do DNA dos organismos vivos tornou-se numa técnica de rotina em laboratórios de investigação. São milhares as sequências de ADN conhecidas, desde vírus, bactérias e humanas. O número de tecnologias e técnicas tem vindo a crescer duma forma quase exponencial. O ADN pode ser extraído de qualquer amostra que contenha células nucleadas (sangue, cabelo, tecidos).

1- Análise de poliformismos ou RFPL (Restriction Fragment Length Polymorphisms)

Após a extracção, o ADN é cortado por enzimas de restrição. Cada uma destas enzimas têm a capacidade de cortar a dupla cadeia do ADN em sítios que lhe são especificas.
O tamanho dos fragmentos produzidos é constante num indivíduo mas variáveis na espécie, devido às diferenças nas sequências não codificantes do ADN. Esta característica serve de base a um dos tipos de análise do ADN: Análise dos polimorfismos ou RFLP.
Os fragmentos de ADN produzidos pelas enzimas de restrição podem ser separadas segundo o seu tamanho, por electroforese em gel de agarose, por meio de uma corrente eléctrica. Os fragmentos mais pequenos migram mais rapidamente do que os maiores. O resultado é um rasto de fragmentos de ADN no gel, progressivamente mais pequenos. Os fragmentos de dupla cadeia de ADN retirados a partir do gel, podem ser separados em duas cadeias (desnaturação) e transferidos para uma membrana de nitrocelulose ou nylon (Técnica de Southern blotting). Os fragmentos fixam-se duma forma estável à membrana, alinhados nas mesmas posições em que se encontravam no gel (figura1).

FIGURA I - Técnica de Southern Blotting